CRISPR/Cas9基因靶向修飾技術培訓班邀請函

發布時間:2020-01-14 13:33:05

 
尊敬的       :您好! 
 
CRISPR是繼RNA干擾技術、高通量測序技術等之后生物科學發展歷史上最具顛覆性技術之一,使用高效、迅速且簡單,在生物醫學研究領域引起一場巨變,并因此成為生物醫學實驗室常規技術。隨著CRISPR基因治療臨床實驗的初步成功,以及2018年的基因編輯嬰兒事件預熱,CRISPR技術被越來越多的研究人員用來改造人類基因以消除疾病,創造生命力更加頑強的植物,消滅病原體等。在過去的7年中CRISPR技術斬獲了生命科學領域各種重量級獎項,包括生命科學突破獎,蓋爾德納國際獎等,《Science》年度突破、《Nature》年度人物均授予了CRISPR單堿基基因編輯技術的突破,2019年9月,北京大學鄧宏魁組完成世界首例基因編輯治療艾滋病和白血病,使CRISPR技術再一次成為生命科學的焦點。 
 
隨著近幾年的發展,研究者開發出越來越多基于CRISPR的新型基因編輯技術,例如CRISPR轉錄激活/抑制技術,基因定位,表觀遺傳修飾,單堿基基因編輯系統(BE2,BE3,ABE等),CRISPR基因突變檢測系統(Sherlock、DETECTR),無修復模板基因敲入技術等。CRISPR/Cas9系統的應用更加便捷、高效,也更廣泛,目前該技術成功應用于人類細胞、斑馬魚、小鼠以及細菌等基因組精確修飾,成為科研人員的強大工具,基于CRISPR臨床實驗已經取得初步成功。 
 
為了讓更多的科研人員及時全面的掌握CRISPR最新技術,并應用的相應的領域研究中。特于2020年2月22日至23日在北京舉辦CRISPR/Cas9基因靶向修飾技術培訓班。在帶教教師的指導下,學員獨立完成一系列全部實驗,免費獲得三份CRISPR/Cas9敲除質粒載體(可以用于哺乳動物、植物、真菌、細菌、斑馬魚、線蟲等,共60種)。免費贈送sgRNA離線設計軟件(有基因組DNA序列即可設計!) 
 
課程安排:
 

日期

時間

培訓內容

授課老師

222

8:00-8:50

培訓報到

劉剛博士

2008年博士畢業于中國科學院上海生命科學研究院,從事腫瘤干細胞,細胞衰老,腫瘤轉移等細胞作用網絡和通路的研究,并作為骨干研究人員參加了973計劃項目、國家自然科學基金重點項目、在香港中文大學做為作為PostdocResearch fellow,從事研究工作。先后Nature Geneticscell researchPLOS one等期刊發表論文十余篇。

222

9:00-11:30

理論講解:

一、基因編輯技術簡介(三代基因編輯工具)

1. ZFN 2.TALEN 3.CRISPR

二、CRISPR/Cas9基因編輯技術原理

1. CRISPR/Cas9發現歷史

2. CRISPR/Cas9作用機制解析

3. CRISPR/Cas9系統改造策略

13:00-17:00

理論講解

一、sgRNA在線設計構建實戰演練(1.靶基因序列查找2.sgRNA在線設計合成)

二、CRISPR/Cas9轉染策略:

1.生物轉染(慢病毒、腺相關病毒等)

2.物理轉染 (電轉核酸/RNP、顯微注射、基因槍)

3.化學轉染 (脂質體、陽離子聚合物)

三、CRISPR/Cas9 sgRNA效率檢測,脫靶檢測及解決策略

1、高保真Cas9espCas9Hifi-Cas9Cluster1-Cas9

223

9:00-11:30

理論講解:

一、CRISPR技術應用解析

1.基因敲除(單基因敲除、多基因敲除、大片段刪除、多靶點sgRNA載體構建策略)

2.基因敲入實戰演練(gRNA選擇、同源臂設計、導入,長片段導入策略/提高基因敲入效率策略,PITChHITICRISPR-轉座酶高效基因敲入系統)

3.CRISPR在轉錄調控中的應用(轉錄激活、轉錄抑制系統)

4.CRISPR靶基因標記定位

二、CRISPR案例解析

1.基因敲除在小鼠模型構建、植物、細胞、細菌、真菌等中的應用案例解析

2.基于CRISPR的全基因組基因敲除高通量篩選策略(文庫構建,選擇,流程優化等)

3.基于CRISPR的全基因組轉錄激活/抑制高通量篩選策略(文庫構建,選擇,流程優化等)

三、CRISPR/Cas9與基因沉默技術(siRNAshRNA)系統比較。

13:00-17:00

理論講解:

一、單堿基基因編輯技術簡介及在基因治療中的應用

1.HF2-BE2 2.BE3系統 3.ABE系統4.單堿基基因編輯脫靶克服。

二、基因CRISPR的基因檢測系統

1CRISPR-Cas12a系統介紹(DETECTR)

2CRISPR-Cas13a系統介紹(SHERLOCK-多重病原菌檢測)

三、CRISPR/Cas9系統在腫瘤和遺傳病治療中應用解析

1CRISPR結合免疫檢查點抑制劑治療腫瘤

2、單基因遺傳病治療(DMD、先天性黑朦、地中海貧血等)

3CRISPR治療HIV-基因編輯嬰兒解析

4CRISPR治療HIV炎性白血病病例解析

四、新一代無模板基因敲入系統解析

1.  1CRISPR Primer-editing 基因敲入原理及應用

日期

時間

培訓內容

223

18:00

實驗操作:CRISPR/Cas9敲除質粒轉染靶細胞

224

9:00-11:30

實驗操作:一、CRISPR/Cas9基因表達載體克隆構建1.sgRNA設計合成

2.敲除載體選擇及線性化

3.sgRNA連接,轉化等

13:00-17:00

實驗操作:

1.CRISPR/Cas9轉染后靶DNA檢測

2.靶基因修飾位點擴增及鑒定

3. CRISPR基因敲除效果檢測

 
舉辦地點: 
 
北京市西城區德外大街11號康華偉業孵化器A325-A343(近北京師范大學) 
 
參加對象 
 
從事醫學、生命科學、農學等領域科研工作者和高校教師及研究生。 
 
授課方式 
 
1.理論講授。 
 
2.每位學員在輔導教師的指導下,獨立完成實驗操作。(可選) 
 
收費標準 
 
注冊費:3200元/人,2020年2月13號之前匯款報名可以優惠至:3000元/人。實驗操作課程需加500元/人。同一個單位三個人以上報名可以免費構建價值1500元的質粒一個;包括學費、資料費、試劑耗材費、其他材料費;免費提供工作午餐,住宿用自理。 
 
銀行匯款 
 
北京微旋基因技術有限公司 
 
開戶行: 中國建設銀行北京宣武支行 
 
賬 號:11001019500053058529 
 
備 注:銀行轉賬的學員,請于匯款單備注欄內注明參會人姓名 
 
聯系人 
 
鄭老師 010- 53516075 sales@micro-helix.com  
 
 
 

 

 CRISPR 質 粒 清 單

 

Plant

#50588

pHSN401

CRISPR/Cas based plant genome editing and gene regulation; expresses 3×FLAG-NLS-zCas9-NLS, gRNA scaffold for insertion of target sequence (AtU6-26 promoter), Hyg resistance

#63142

pRGEB32

(Empty Backbone) Express sgRNA/PTG with rice snoRNA U3 promoter and Cas9 with rice ubiquitin promoter for Agrobacterium-mediated transformation.

#51295

pRGEB31

(Empty Backbone) Binary vector derived from pRGE31. Deliver sgRNA and Cas9 into plant. by agrobacterium mediated transformation.

Insect

#49330

pAc-sgRNA-Cas9

Expresses sgRNA and Cas9-Puro in Drosophila S2 cells

C.elegans

#47549

pDD162

Cas9 + sgRNA plasmid that can be modified to cleave any Cas9 target site in the C. elegans genome.

Yeast

Bateria

#43804

p415

Human Optimized S. pyogenes Cas9

#42875

pCRISPR

A crRNA expression plasmid for targeting a specific sequence

 

#84379

pRH2502

Expression of dcas9 D10A H840A from a TetR-regulated uvtetO promoter

#84380

pRH2521

Expression of sgRNA from a imyc promoter (Pimyc)

#61737

pCRISPomyces-2

Streptomyces expression of codon-optimized Cas9 and custom gRNA

#42876

pCas9

Bacterial expression of Cas9 nuclease, tracrRNA and crRNA guide

Zebrafish

#47929

pCS2-nCas9n

expression of an optimized Cas9 for genome-editing in zebrafish

Mammalian

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

#52970

FokI-dCas9

Expresses Fok1 nuclease domain fused to catalytically inactive Cas9 DNA-binding domain in mammalian cells

#61591

PX601

A single vector AAV-Cas9 system containing Cas9 from Staphylococcus aureus (SaCas9) and its sgRNA.

#42229

PX260

This plasmid separately encodes a human codon-optimized SpCas9, a tracrRNA and customizable crRNA.

#42230

PX330

A human codon-optimized SpCas9 and chimeric guide RNA expression plasmid.

#48138

PX458[GFP]

Cas9 from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA

#48139

PX459[Puromycin]

Cas9 from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA (V2.0)

#48140

PX461

Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA

#48141

PX462[Cas9n,Puromycin]

Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA

#50661

pCW-Cas9[Tet-on,Puromycin]

Inducible lentiviral expression of SpCas9

#52963

LentiGuide-puro-Vector

Expresses S. pyogenes CRISPR chimeric RNA element with customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter. Lentiviral backbone.

#52962

lentiCas9-Blast

Expresses human codon-optimized S. pyogenes Cas9 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. 3rd generation lentiviral backbone.

#69982

pY010 (pcDNA3.1-hAsCpf1)

 Expresses humanized AsCpf1

#19319

pLJM1-EGFP

(Empty Backbone) 3rd gen lentiviral vector for EGFP fusion; PGK driven puromycin

#12259

pMD2.G

VSV-G envelope expressing plasmid

#12260

psPAX2 

Lentivirus package plasmids

#61427

lenti sgRNA(MS2)_zeo backbone

(Empty Backbone) 3rd generation lenti sgRNA cloning backbone with MS2 loops at tetraloop and stemloop 2 and EF1a-zeo resistance marker. Contains BsmBI sites for insertion of spacer sequences.

#61426

lenti MS2-P65-HSF1_Hygro

lenti vector encoding the MS2-P65-HSF1 activator helper complex with a 2A Hygro resistance marker (EF1a-MS2-p65-HSF1-2A-Hygro-WPRE)

#61425


lenti dCAS-VP64_Blast

3rd generation lenti vector encoding dCAS9-VP64 with 2A Blast resistance marker (EF1a-NLS-dCas9(N863)-VP64-2A-Blast-WPRE)

#71814

eSpCas9(1.1)

Expresses high specificity SpCas9. Px330-like plasmid.

#47327

pET-28b-Cas9-His

For in vitro expression and purification of Cas9 protein

#62934

pET-NLS-Cas9-6xHis

Expression of NLS-Cas9-6xHis in bacterial cells

86840

pJH373

mamalian expression of AcrIIA2

84750

Lenti-AsCpf1-Blast

Expresses human codon-optimized AsCpf1 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. Lentiviral backbone.

84752

Lenti_gRNA-Puro

(Empty Backbone) Expresses Cpf1 customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter

79145

pCAG-eCas9-GFP-U6-gRNA

All-in-one CRISPR/Cas9 vector with high-fidelity eSpCas9 expression in human pluripotent stem cells

84745

pY30

Expresses huAsCpf1-P2A-puro and crRNA guide

84743

pY094

Expresses huAsCpf1-T2A-GFP and crRNA guide

84741

pY026

Expresses huAsCpf1 and crRNA guide

60958

PX552

pAAV-U6sgRNA(SapI)_hSyn-GFP-KASH-bGH (SpGuide acceptor). AAV plasmid for sgRNA cloning. GFP-KASH fusion facilitates FACS sorting of cells and nuclei.

79152

pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning

LshC2c2 locus in pACYC184 with BsaI sites for spacer cloning

79150

pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression

Expresses human codon-optimized LshC2c2 for purification in E. coli

64324

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mCherry

Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to mCherry via a T2A peptide

64222

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mcherry-P2A-Ad4E4orf6

Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked via T2A to mCherry linked to the Ad4 E4orf6 gene via P2A

64218

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP-P2A-Ad4E1B

Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked to BFP via T2A linked to Ad4 E1B via P2A

64323

pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP

Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to BFP via a T2A peptide

51023

pSLQ1658-dCas9-EGFP

Template for NLS-dCas9-NLS-EGFP fusion protein for CRISPR imaging (the recipient vector can be TetON 3G promoter system)

64108

pHAGE-TO-dCas9-3XmCherry

Expression of Sp dCas9-3XmCherry in mammalian cells

60957

PX551

pAAV-pMecp2-SpCas9-spA (AAV-SpCas9). AAV plasmid expressing Cas9 in neurons under control of truncated mecp2 promoter.

100806

BE4-Gam

Expresses BE4-Gam in mammalian cells

100809

SaBE4-Gam

Expresses SaBE4-Gam in mammalian cells

102917

pCMV-ABE7.8

expresses ABE7.8 in mammalian cells

102919

pCMV-ABE7.10

expresses ABE7.10 in mammalian cells

108382

xCas9(3.7)-ABE(7.10)

Mammalian expression vector for xCas9(3.7)-ABE

 
北京微旋基因技術有限公司
 
聯系電話:010-53516075 郵箱:sales@micro-helix.com 地址:北京市西城區德外大街11號康華偉業孵化器A343

會議時間2020-02-22至2020-02-23
會議地點北京

聲明:

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